Kit utilizado para la separación y marcaje del núcleo celular para la identificación de anormalidades en el DNA y la distribución de las células en el ciclo celular.

PROCEDIMIENTO:
1) Poner en el tubo un volumen de la muestra que contenga 1x10⁶ células.
2) Poner 2 ml de solución de lisis para DNA que se fabrica de la siguiente forma:

- En 100 ml de agua destilada.
- 0,829 gr de Cloruro Amónico.
- 0,0037 gr de EDTA Na2.
- 0,100 gr. de Bicarbonato potásico
- Ajustar el pH a 7.3
- Almacenar a 4 C (caduca a los 7 días).
Esta solución lisante lisará los hematíes, pero no fijará la membrana de las células nucleadas.

3) Agitar correctamente e incubar durante 10 minutos.
4) Centrifugar a 300g. durante 5 min. a temperatura ambiente.
5) Decantar y resuspender el botón.
6) Poner 1.5 ml de tampón citrato del kit.
7) Centrifugar a 300g. durante 5 minutos a temperatura ambiente.
8) Decantar el sobrenadante.
9) Resuspender el botón.
10) Añadir 250 ul de la solución A del kit que lleva tripsina y un detergente.
11) Tapar la boca del tubo con parafilm y homogeneizar la suspensión mediante inversión del tubo (no centrifugar).
12) Dejar tumbado horizontalmente el tubo a temperatura ambiente en lugar oscuro durante 10 min.
13) Añadir 250 ul de la solución B del kit para bloquear la acción de la tripsina y además al poseer ribonucleasa eliminar el ARN nuclear que estuviera unido al ADN y que reaccionaria con el ioduro de propidio si no se destruyese.
14) Volver a tapar la boca del tubo con parafilm y homogeneizar mediante inversión del tubo (no centrifugar).
15) Dejar tumbado horizontalmente el tubo a temperatura ambiente en lugar oscuro durante 10 min.
16) Añadir 250ul de solución C del kit que contiene ioduro de propidio. El ioduro de propidio se une al ADN de forma estequimétrica marcándolo.
17) Volver a tapar la boca del tubo con parafilm y homogeneizar mediante inversión del tubo (no centrifugar).
18) Incubar durante 15 min. con el tubo tumbado horizontalmente a temperatura ambiente y en lugar oscuro.
19) Leer en el citómetro en las siguientes 6 horas por medio de una calibración y plantilla de adquisición especial para DNA. Hasta su lectura mantener a 4C.(www.citometriadeflujo.com)