MARCAJE DE CADENAS LIGERAS KAPPA/LAMBDA Y PESADAS DE INMUNOGLOBULINAS

Técnica usada para la detección de cadenas ligeras Kappa y Lambda, así como para cadenas pesadas IgM, IgD, IgA e IgG en la superficie celular linfoide B. Por medio de lavados eliminamos las cadenas ligeras y pesadas séricas, y por medio de la incubación a 37 C evitamos el efecto de internalización de las Ig (fenómeno Capping). Posteriormente se realiza una técnica de marcaje directo.

PROCEDIMIENTO:
1) Añadir 1x106 del células a cada tubo.
2) Añadir 5 ml de PBS.
3) C
entrifugar a 300g. durante 5 min .
4)
Quitar el sobrenadante con pipeta Pasteur.
5) Resuspender el botón.
6) Repetir pasos 2-5.
7) Añadir 5 ml de PBS.
8) I
ncubar en baño María durante 30 min. a 37 C.
9) Centrifugar a 300g. durante 5 min.
10) Quitar el sobrenadante con pipeta Pasteur.
11) Resuspender el botón.
12) Realizar técnica de marcaje de superficie o intracitoplásmico.
13) Adquirir en el citómetro. (www.citometriadeflujo.com)