Técnica
usada para la detección de cadenas ligeras Kappa y Lambda, así
como para cadenas pesadas IgM, IgD, IgA e IgG en la superficie celular linfoide
B. Por medio de lavados eliminamos las cadenas ligeras y pesadas séricas,
y por medio de la incubación a 37 C evitamos el efecto de internalización
de las Ig (fenómeno Capping). Posteriormente se realiza una técnica
de marcaje directo.
PROCEDIMIENTO:
1) Añadir 1x106 del células a cada tubo.
2) Añadir 5 ml de PBS.
3) Centrifugar
a 300g. durante 5 min .
4) Quitar
el sobrenadante con pipeta Pasteur.
5) Resuspender el botón.
6) Repetir pasos 2-5.
7) Añadir 5 ml de PBS.
8) Incubar
en baño María durante 30 min. a 37 C.
9) Centrifugar a 300g. durante 5 min.
10) Quitar el sobrenadante con pipeta Pasteur.
11) Resuspender el botón.
12) Realizar técnica de marcaje
de superficie o intracitoplásmico.
13) Adquirir
en el citómetro. (www.citometriadeflujo.com)