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1) Hacer los reactivos necesarios:
- Paraformaldehido al 0,5% en PBS.
- Buffer de lavado:
          . PBS
          . 1% de SFB (Suero Fetal Bovino).
          . 0.1% de NaN3.
- Buffer de marcaje:
          . PBS.
          . 1% de SFB
          . 0.1% de NaN3.
          . 0.1% de Saponina.
Estos reactivos se almacenan a 4ºC.
2) Añadir 1x10⁶ células a un tubo (capa mononucleada).
3) Añadir los AcMo de superficie.
4) Incubar 10 min. a temperatura ambiente y oscuridad.
5) Añadir 2 ml de paraformaldehido al 0.5% en PBS.
6) Incubar 30 min. a 4ºC en hielo y oscuridad.
7) Añadir 3ml de Buffer de Lavado.
8) Centrifugar a 300 g. durante 5 min.
9) Decantar el sobrenadante.
10) Resuspender el botón en 100µl de Buffer de marcaje.
11) Añadir el Ac policlonal anti-Caspasa 3.
12) Incubar durante 20-30 min. a 4ºC en oscuridad.
13) Añadir 5 ml de Buffer de marcaje.
14) Mezclar.
15) Centrifugar a 300 g. durante 5 min.
16) Decantar el sobrenadante.
17) Resuspender el botón en 0.5 ml de Buffer de lavado.
18) Adquirir antes de que transcurra 1 hora después del marcaje. (www.citometriadeflujo.com)

Las caspasas son cisteín serín proteasas que cortan proteínas tras un residuo de ácido aspártico (de ahí su denominación). Estas proteínas pueden estar implicadas en procesos de inflamación y en apoptosis. Las caspasas en apoptosis, pueden actuar en la iniciación del desmantelamiento celular (caspasas iniciadoras) o en la ejecución de dicho desmantelamiento (caspasas ejecutoras). Dentro de este último grupo, se encuentra la caspasa-3.
Las caspasas se encuentran inicialmente como procaspasas inactivas que requieren un corte proteolítico para su correcta activación .
La siguiente técnica hace referencia a la detección de caspasa-3 activa mediante citrometría de flujo y con marcaje directo (caspasa-3 PE). (www.citometriadeflujo.com)